O mercado da equinocultura está em crescimento no Brasil e, com isso, as biotécnicas aplicadas à reprodução se tornam grandes aliadas para a busca de melhores resultados. Neste contexto, vários métodos laboratoriais para avaliação do sêmen equino vêm sendo utilizados.
A fertilidade do macho é responsável pelo sucesso de todo o processo. Assim, a avaliação do sêmen de um garanhão é mais demorada e recomenda-se combinar o resultado de todos os testes para aumentar a confiabilidade da estimativa de fertilidade e ajudar a definir o potencial fecundante.
Mas, afinal, quais são as principais técnicas usadas durante o processo? Conheça os métodos laboratoriais mais aplicáveis ao logo do texto.
Técnicas utilizadas para avaliação do sêmen equino
Fatores como ambiente, manejo reprodutivo e fertilidade das éguas também são fundamentais para o bom resultado da reprodução. Entretanto, o macho merece destaque por atender um número maior de fêmeas e ser o ponto crítico para o resultado final.
Por este motivo, há a necessidade de estabelecer a capacidade reprodutiva de um garanhão antes de iniciar a estação. Dentre as técnicas utilizadas para avaliar o sêmen equino, separamos:
- Avaliação computadorizada da motilidade espermática;
- Avaliação automatizada da morfometria espermática;
- Uso de sondas fluorescentes na avaliação espermática;
- Avaliação das proteínas do plasma seminal e membranas espermáticas;
- Avaliação da estrutura da cromatina espermática;
- Avaliação espermática por citometria de fluxo.
Avaliação computadorizada da motilidade espermática
As avaliações da morfometria espermática pelo sistema computadorizado são realizadas, normalmente, por esfregaços corados, em aumento de 1.000 vezes. As imagens destinadas à avaliação da morfometria da cabeça dos espermatozóides são avaliadas pelo software Metrix, instalado no aparelho Hamilton Thorne Research Motility Analyser.
Recentemente, a morfometria espermática de algumas espécies animais tem sido estudada com auxílio de instrumentos automatizados.
Avaliação automatizada da morfometria espermática
A avaliação automatizada da motilidade dos espermatozóides é de grande interesse devido ao fato da cinética espermática ter relevância na determinação do no seu potencial de fertilidade. Dentre esses parâmetros, a velocidade progressiva e os padrões de movimentação celular têm sido correlacionados com penetração no muco cervical, penetração em oócitos de hamster e resultados de fertilização in vitro.
Uso de sondas fluorescentes na avaliação espermática
A técnica que utiliza sondas fluorescentes vem ganhando importância por sua característica de marcar estruturas específicas das células e de detectar integridade estrutural ou funcionalidade de forma clara.
Várias sondas fluorescentes podem ser utilizadas para a avaliação da integridade da membrana plasmática espermática, porém o iodeto de propídio (PI) é destaque em pesquisas pela sua facilidade de preparação e aplicação da técnica, estabilidade e eficiência na avaliação da integridade da membrana, seja isoladamente ou associada a outro corante fluorescente para avaliar membrana plasmática.
Avaliação das proteínas do plasma seminal e membranas espermáticas
Todos os eventos da reprodução são mediados por um número de proteínas. Para os equinos algumas já foram identificadas, como a família de proteínas ricas em cisteína (CRISPs), a família das espermadesinas e a família de proteínas com número variável de domínios de fibronectina do tipo II (Fn-2).
Avaliação da estrutura da cromatina espermática
A análise da estrutura da cromatina do espermatozóide (SCSA) é um método para determinar a susceptibilidade do DNA espermático à desnaturação, a qual é relacionada à fertilidade. O teste usa uma sonda metacromática, laranja de acridina, para avaliar a relação do DNA simples e o duplo-filamento.
Avaliação espermática por citometria de fluxo
Em garanhões, a citometria de fluxo, têm sido aplicada para avaliar a integridade da membrana plasmática e o estado do acrossoma com o uso do Iodeto de propídeo. Além da análise da integridade da membrana plasmática e acrossomal, a citometria de fluxo combinada ao uso de fluoróforos permite a avaliação do potencial de membrana mitocondrial, integridade do DNA, peroxidação lipídica, capacitação e reação acrossômica, apoptose, entre outros.
Aprenda a realizar a avaliação do sêmen equino
Todos os testes laboratoriais de análise de sêmen buscam a predição da capacidade fertilizante do sêmen. Quem trabalha com reprodução equina e quer alcançar eficiência precisa saber realizá-los. Faça parte dos especialistas no assunto com o Curso de Exame Andrológico em Equinos – manipulação, avaliação e criopreservação de sêmen e aprenda as técnicas!
Fontes: Da Silva, Rômulo Oliveira Fernandes; Rev Bras Reprod Anim, Belo Horizonte, v.31; Ciência Animal, v.28, n.4; M.I.V. Melo, M. Henry, A.R.C.L. Beker.
